试验时间
2023/10/16
试验目的
不同粒径的时间分辨荧光粒子对线性和灵敏度的影响。
试验准备
标准品准备：使用PB缓冲液，将国家标准品稀释成10000、2000、1000、500、100、25、5 mIU/mL，直接用缓冲液作为阴性对照。
试纸条准备：参见批号20230506；
试剂制备： 分别使用上海伊普瑞100 nm和170 nm的时间分辨粒子包被hCG单克隆抗体，包被量为1%。制成基本粒子试剂，试剂中粒子浓度为1 μg/μL，批号20230904。
干式试纸条的组装：按照每根试纸条添加1 μL基本粒子试剂、10 μL干法释放试剂，充分混匀后用移液器点到结合垫上，放于37 ℃烘箱中烘30 min，然后组装卡壳。
上样：取80 μL校准品上样，并在15 min时读取荧光强度。
试验结果与分析
170 nm粒子标记抗体的试验结果如下图.1所示。
从图.1结果看，阴性和5 mIU/mL可以明显区分开，灵敏度完全符合要求。但高值区域，线性达到1000 mIU/mL后荧光强度开始下降，出现明显的HOOK效应。但使用170 nm的粒子制备的粒子基本试剂分散性良好，几乎无拖尾现象，粒子释放非常彻底。
为了提高线性，特将170 nm的粒子改为100 nm，抗体的标记量不变。而组装的时候，由 1 μL基本粒子试剂改为2 μL，其它条件不变。其试验结果如图.2所示。
从图.2 结果看，阴性和5 mIU/mL 也可以明显区分开，灵敏度完全符合要求。
高值区域，线性由原来的1000 mIU/mL，提高到2000 mIU/mL，之后荧光强度才开始下降，出现HOOK 效应。
100 nm的粒子制备的粒子基本试剂分散性良好，几乎无拖尾现象，粒子释放非常彻底。其实际效果，请参考图.3。
试验结果与分析
1. 上海辉质生物的时间分辨纳米粒子标记抗体后，性能稳定，试剂分散性良好；
2. 该粒子荧光强度足以开发高灵敏度的项目；
3. 本项目中，100 nm 在线性上明显优于170 nm，契合“粒径越小，越有利于线性”。在后续试验中，可以通过调节膜的包被量其它策略，来提高检测整体的线性。
